A manometria esofágica é o método padrão-ouro para o diagnóstico da acalasia. Este estudo revela uma pressão elevada do esfíncter esofágico inferior (EEI) e uma relaxamento insuficiente durante a deglutição. Métodos complementares como a esofagografia (radiografia de esôfago com bário) e a endoscopia também são utilizados no processo diagnóstico. A esofagografia tipicamente mostra uma dilatação do esôfago superior e um estreitamento distal característico em "bico de pássaro". O exame endoscópico revela uma resistência significativa no esfínter esofágico inferior; o esôfago parece estreitado distalmente e, por vezes, podem ser observadas alterações secundárias devido à estase crônica, como a esofagite fúngica.