विटामिन डी परीक्षण विभिन्न स्वास्थ्य स्थितियों के आकलन और विशिष्ट जोखिम कारकों वाले व्यक्तियों में आमतौर पर अनुरोध किया जाता है। प्राथमिक कारणों में अस्थिमृदुता, ऑस्टियोपोरोसिस और पेजेट रोग जैसी हड्डियों की बीमारियाँ, मस्कुलोस्केलेटल लक्षण, अपर्याप्त धूप के संपर्क में आना, मोटापा, बार-बार गर्भधारण या स्तनपान कराने वाली माताएँ, और कुछ दवाओं का उपयोग शामिल हैं। इसके अलावा, यह परीक्षण सिस्टिक फाइब्रोसिस, मल्टीपल स्केलेरोसिस (एमएस), अल्सरेटिव कोलाइटिस और क्रोहन रोग जैसी पुरानी स्थितियों की निगरानी के लिए महत्वपूर्ण है। वृद्धावस्था और रजोनिवृत्ति के दौरान भी व्यक्तियों में विटामिन डी के स्तर की निगरानी की सलाह दी जाती है।