Le diagnostic de spina bifida peut être établi à un stade précoce grâce aux examens échographiques de routine effectués pendant la grossesse. L'analyse du liquide amniotique pendant la grossesse et une augmentation anormale du liquide amniotique sont également des indicateurs importants dans le processus de diagnostic. Après la naissance, la surveillance des symptômes évidents ou la recherche de signes cachés est également d'une importance capitale pour le diagnostic. Suite à un examen clinique effectué par un neurochirurgien, le diagnostic de spina bifida chez les patients présentant une suspicion est confirmé par des méthodes d'imagerie radiologique telles que l'Imagerie par Résonance Magnétique (IRM) et la Tomodensitométrie (TDM).