Le diagnostic de la maladie d'Orf commence principalement par une évaluation minutieuse des plaintes et des symptômes du patient, suivie d'un examen physique. En cas de suspicion clinique, l'examen microscopique d'échantillons prélevés sur le tissu de la lésion peut aider au diagnostic. Pour un diagnostic plus définitif, des tests de laboratoire tels que des prélèvements viraux, la microscopie électronique ou une biopsie cutanée peuvent être effectués. Le diagnostic définitif de la maladie d'Orf est généralement confirmé par un test PCR (réaction en chaîne par polymérase). Afin d'éviter toute confusion avec d'autres maladies présentant des symptômes similaires, telles que l'anthrax, il est crucial que le processus de diagnostic soit mené avec rigueur.