O padrão ouro para o diagnóstico da acalasia é a manometria esofágica. Este método detecta uma pressão elevada no esfínter esofágico inferior e um relaxamento insuficiente ou ausente do esfínter durante a deglutição. Outros testes diagnósticos complementares incluem a esofagografia (degustação de bário) e a endoscopia. A esofagografia revela uma dilatação da parte superior do esôfago e um estreitamento progressivo em direção à parte inferior (aparência de "bico de pássaro"). Durante a endoscopia, pode-se observar um estreitamento da parte distal do esôfago e achados como esofagite fúngica, que pode se desenvolver devido à estase alimentar.